Tras la separación producida por el roce entre egos, la compañía Mystery Inc. vuelve a reunirse dos años depués. El motivo es la llamada que les cita uno a uno a presentarse en Spooky Island.
En el club nocturno Spring Break, se están produciendo unos hechos extraños sobre los cuales deberán investigar nuestros amigos, eso si, deberán estar preparados para encontrarse con multitud de peligros y fenómenos paranormales.
¿Serán nuestros amigos capaces de descifrar el misterio que envuelve este parque de atracciones?...

Fred Jones. Es el jefe del grupo, aunque su ego crea pequeños conflictos dentro de la banda, es una de las mentes más brillantes a la hora de resolver los misterios que les rodean. Su relación con Scooby-Doo es cordial, salvo por cómo debería ser para él "el comportamiento correcto de un perro".
Freddie Prinze Jr. Tras el éxito de su última película "She´s All That" este joven actor se ha convertido en uno de los más solicitados y más reconocidos de Hollywood. Gracias a su expléndida interpretación, Prinze comenzó a crearse un puesto de honor entre las estrellas más cotizadas de su generación.

Velma Dinkley. Es la auténtica detective del grupo, sus conclusiones son siempre las más acertadas. Su perspicacia y su buen hacer con las trampas la hacen infalible. Suele ir por libre al igual que nuestro amigo Scooby, pero hay un aspecto que los distingue considerablemente: ELLA NO TEME A NADA.
Linda Cardellini. En su historial cinematográfico se encuentran dos películas, una de ellas está por llegar y se titula "Los límites del silencio (The Unsaid)", junto a Andy Garcia, y el verano pasado participó en "Una rubia muy legal", aunque ya la hayamos visto trabajar en otras cintas de éxito menor.

Shaggy Rogers. Es el mejor amigo de Scooby, les une una misma característica: EL MIEDO. Por eso, siempre da al traste con las trampas perpetradas por sus compañeros, aunque esta falta de valor ayuda a la hora de descifrar los enigmas. Su máxima es huir del peligro, pero sin buscarlo, siempre se encuentra con él.
Matthew Lillard. Saltó a la fama por su excéntrica interpretación de asesino adolescente en la película "Scream". A partir del éxito de esta cinta, se le intentó encasillar en el género de terror con películas como "13 Fantasmas", pero ha decidido abarcar más registros con trabajos en "Summer Catch" y "Trabajos de amor perdidos".

Daphne Blake. Es la chica más bella del grupo, le gustan los misterios y piensa ser algun día una escritora de renombre.
Sarah Michelle Gellar. Nominada varias veces a premios televisivos, saltó a la fama gracias a películas como "Se lo que hicísteis el último verano" o "Scream 2". Dentro de su historial cinematográfico también se encuentra la película "Crueles intenciones". Su más reciente actuación se remonta a 2001 con la cinta "Harvard Man" de James Toback.

Mondavarious. Es el empresario que, al parecer, sufre los estragos de los fenómenos sobrenaturales que suceden en el club nocturno Spring Break. El es el encargado de volver a reunir a nuestros amigos para que le ayuden a resolver el problema.
Rowan Atkinson. ¿Que podemos decir de este hombre?. El personaje interpretado por este actor en la serie televisiva "Mr Bean", le hizo más que famoso. Aunque ya había participado en la gran pantalla, se le pudo reconocer en películas de la talla de "Cuatro Bodas y un Funeral", "La maldición de las brujas" de Nick Roeg, y puso la voz al personaje de animación Zazu, en la cinta "El Rey León" de la Disney.